PegIFNα治疗慢乙肝用药指导指标的筛选及NK细胞在慢性乙肝病毒感染中作用的初步探索

【摘要】本文针对聚乙二醇干扰素治疗慢乙肝用药指导指标筛选及NK细胞在慢性乙型肝炎感染过程中的作用两个问题进行探讨,共由两部分研究组成。其中第一部分旨在筛选能够指导聚乙二醇干扰素治疗慢性乙型肝炎用药的指标。乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国乃至全世界最重要的公共卫生问题之一,严重威胁人类健康。目前用于乙肝病毒感染的治疗药物主要有两类：干扰素(普通干扰素(IFNα)和聚乙二醇干扰素(PegIFNα))和核酸类似物(拉米夫定(Lamivudine,LAM)、替比夫定(Telbivudine,LdT)等)。两类药物中因干扰素具有直接抗病毒和免疫调节双重作用,所以临床抗病毒治疗中应用较为广泛,其具有无耐药、有免疫介导的控制HBV感染的潜在作用的优点,从而使治疗结束时患者有机会得到较高的HBeAg血清学转换、更持久的病毒学应答以及HBsAg清除,使这些患者可维持HBVDNA在检测下限。然而使用干扰素a常规治疗6个月治疗的效应率为25%-40%,复发率和停药后的后续效应率均约为15%～20%,持续效应率也仅为25%～40%。治疗效应有很大的个体差异,30%以上的病例需要6个月以上的治疗。另外从治疗费用上看,干扰素α与其他药物有很大区别,治疗1年的大致费用PegIFNα-2a/2b远高于LAM、ADV和ETV等药物。如慢乙肝患者使用干扰素α进行6个月以上乃至24月的抗病毒治疗,治疗失败不仅给患者带来身体和精神上痛苦,而且要承受巨大的经济压力。现在虽然有一些指标用于干扰素α应答的预测,但并不能满足临床需要。有鉴于此,本研究首先通过收集聚乙二醇干扰素治疗前及治疗后24周的慢性乙肝患者的血清样本,以病毒学应答和非病毒学应答进行分组,使用luminex200检测46种人细胞因子,所有细胞因子中CXCL9和IP-10基线水平病毒学应答组高于非应答组,应答组在治疗过程中下降然而非应答组变化无统计学意义。MIP-1d在病毒学应答组基线水平和治疗过程中均显著高于非应答组,而TARC则在毒学应答组基线水平和治疗过程中均显著低于于非应答组。基线水平HBVDNA、HBeAg、TARC、MlPld、CXCL9、CXCL6和IP10具有较好的干扰素治疗病毒学应答的预测效果,其受试者工作特征曲线显示线下面积分别为0.879、0.964、0.77、0.787、0.799、0.722和0.787(p=0.001、p<0.001、p=0.021、p=0.01、p=0.01、p=0.05和p=0.013)。另外CXCL9、CXCL6与ALT具有显著相关性(r=0.588、p=0.002；r=0.530、p=0.005)。综上所述,本研究发现在慢性乙型肝炎治疗前及治疗过程中细胞因子的水平对干扰素治疗慢性乙肝的病毒学应答具有预测效果,可作为慢性乙肝治疗前选择用药的指标。第二部分旨在初步探索NK细胞在慢性乙肝病毒感染过程中对机体抗病毒免疫反应的影响机制。慢性HBV感染患者机体缺乏有效的抗病毒免疫反应,宿主无法及时有效清除体内病毒,致使病毒持续感染。这种免疫耐受状态可能是由于宿主抗HBV的细胞免疫应答处于无能或被抑制状态造成的。新近研究发现慢性病毒感染者免疫耐受状态的形成可能与NK细胞活化后抑制T细胞反应密切相关,NK细胞通过不同途径限制T细胞功能,包括NK细胞通过影响抗原递呈影响T细胞功能,NK细胞通过分泌细胞因子改变T细胞反应,或通过NK的裂解作用调节T细胞免疫反应等。通过阻断NK活性或直接删除NK细胞可能恢复病毒特异性T细胞活性,逆转免疫耐受,激活宿主抗病毒免疫应答以促进HBV的清除,可能是治疗慢乙肝药物的研究方向之一。本研究从在体和体外实验两个方面去初步探索NK细胞在慢乙肝中的作用机制。在体实验中,我们利用HBV转基因小鼠为模型,使用Anti-NK1.1单抗阻断NK细胞活性,结果显示阻断NK细胞活性后可使HBV转基因小鼠血清HBVDNA和HBsAg水平发生显著降低,在阻断后的第三天效果最为显著,HBVDNA较治疗前下降约1.5log10,HBsAg较治疗前下降约1.0log10。体外实验中,提取慢乙肝患者PBMC后分选删除NK后使用核心抗原多肽与PBMC及删除NK细胞的PBMC共培养,结果显示NK删除后大部分患者能恢复病毒特异性CD8+IFN-γ+T细胞的比例。综上所述,本研究在HBV转基因小鼠模型和体外实验中初步证实了NK细胞的删除可恢复宿主的抗病毒状态,为NK细胞作为慢乙肝免疫治疗新靶向奠定了基础。
【作者】林延延；
【导师】刘平果；
【作者基本信息】厦门大学，外科学，2014，硕士
【关键词】乙型肝炎病毒；干扰素α；细胞因子；自然杀伤细胞；

【参考文献】
[1]闫长丽.“中国近现代史纲要”实践教学路径探究——以北京历史文化资源为依托[J].山西高等学校社会科学学报,2014,11:47-50.
[2]黄研.基于Ajax的知识管理系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2012,硕士.
[3]王舒璎.文化身份的语言表征[D].上海外国语大学,英语语言文学,2012,硕士.
[4]王婉.论行政垄断的反垄断法规制[D].云南财经大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[5]魏汝领.中国山地户外运动成绩分析及提高对策研究[D].中国地质大学（北京）,体育教育训练学,2013,硕士.
[6]李东书.彩钢夹芯板房与救灾单帐篷防火间距的研究[D].重庆大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2014,硕士.
[7]吴永兵.EAST新型四电极ICRF加热天线设计与研究[D].合肥工业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[8]王帅军.基于机器人的玻璃堆垛系统研究[D].河南科技大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[9]饶聪超,姜献峰,李俊源,杨德伟,陈林林.高密度聚乙烯结构发泡塑料拉伸本构关系的研究[J].中国塑料,2012,07:66-69.
[10]李风娇.新加坡特殊教育政策内容分析[D].西北师范大学,比较教育学,2013,硕士.
[11]王璐曼.中国上市公司财务重述与董事会特征关系研究[D].天津财经大学,会计学,2012,硕士.
[12]高华.条件推理双重加工的发展性研究[D].南京师范大学,2007.
[13]张为中.多触摸环境下的软件交互方式研究[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[14]侯经华.呼和浩特市入口景观现状调查与优化研究[D].内蒙古农业大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[15]逯峰.工业遗产保护与更新开发策略研究[D].青岛理工大学,建筑设计及其理论,2012,硕士.
[16]豆飞.铁路旅客出行选择行为及客运网配流优化方法研究[D].北京交通大学,2014.
[17]颜欢.XMPP协议的安全性分析及其应用研究[D].西安电子科技大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[18]潘辉.新疆卡拉库尔羊Fas基因的克隆、原核表达及抗原性分析[D].塔里木大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[19]张立君.期权定价模型在碳排放权评估中的应用研究[D].北京交通大学,2014.
[20]石敏.面向Web网页的自动化测试技术研究[D].东华大学,计算机技术（专业学位）,2014,硕士.
[21]庞相涛.双凸极无刷直流电机调压器及数字调速系统的研究[D].南京航空航天大学,电力电子与电力传动,2004,硕士.
[22]沈忱.创业板上市企业公司治理对财务风险的影响机制研究[D].浙江大学,2014.
[23]王飞.关联理论视角下的英语新闻标题汉译研究[D].河北师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[24]沈云琴.基于.NET的项目管理系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2011,硕士.
[25]蔡卫忠.公民意识养成视阈下的大学生法律教育问题研究[D].山东大学,思想政治教育,2014,博士.
[26]徐菲一.蛋白质与DNA相互作用的结构研究[J].生物技术世界,2014,03:4.
[27]代红.数据挖掘在数据库决策系统中的实现[J].鞍山钢铁学院学报,2002,05:372-374.
[28]茹利利.LFEC铸造工艺的镁合金传热与凝固研究[D].东北大学,材料加工工程,2010,硕士.
[29]袁梦佳.影响图在软件项目风险管理中的应用[D].河北科技大学,工业工程,2012,硕士.
[30]翟爱霞.离子液体烷基化催化剂的研究[D].大庆石油学院,化学工艺,2004,硕士.
[31]吴根土.两种植物病毒编码的RNA沉默抑制子在寄主体内的功能研究[D].浙江大学,植物病理学,2014,博士.
[32]杨广义.动平台机构的特性分析与仿真研究[D].西安理工大学,印刷工程,2004,硕士.
[33]刘闯.面向大中型制造业物料采购的电子商务模式研究[D].大连海事大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[34]王贵贵.环形平面EMI滤波器设计的基础研究[D].南京航空航天大学,电机与电器,2012,硕士.
[35]姚娜.西藏班戈绒山羊高海拔环境适应性的遗传分析[D].中国农业科学院,动物遗传育种与繁殖,2014,博士.
[36]张玉娟.河南省FDI和产业集群互动关系的实证研究[D].中原工学院,企业管理,2012,硕士.
[37]陈艳慧.中石油东方物探公司集中采购模式研究应用[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[38]郝琳璐.高速滚珠旋压力解析模型与工艺参数优化[D].太原科技大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[39]张丽雯.身体社会学视角下尘肺病农民工群体的身体体现[D].华中师范大学,社会学,2014,硕士.
[40]郭晓芳.钢球磨煤机解耦控制实验系统的软件平台设计与开发[D].东北大学,控制理论与控制工程,2009,硕士.
[41]钱林瀚.基于实时操作系统MQX的数字示波器应用与研究[D].苏州大学,计算机技术（专业学位）,2014,硕士.
[42]蔡小玲,汪小帆,王执铨.主动队列管理中RQC控制器的设计[J].控制与决策,2005,04:478-480.
[43]赫杰,张颢,张丽丽.高校遗传学实验考核方式的改革探析[J].遗传.
[44]龚志勇.乐山配电网三维可视化计算机系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[45]彭鹤.中小学校长魅力型领导及其对教师组织承诺影响的研究[D].首都师范大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[46]陈寅.植物叶形状与叶脉结构的自动分类研究[D].浙江理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[47]薛克勋.城市应急指挥基于GIS的智能辅助决策探究[J].警察技术,2002,01:10-12.
[48]高茜.黄土沿第三纪不整合面滑坡机理及防治措施[D].长安大学,防灾减灾工程及防护工程,2014,硕士.
[49]魏文光,孙宝正,陈鸿业.中温螺栓钢20Cr1Mo1VNbTiB粗晶的本质及其晶粒遗传机理探讨[J].四川冶金.1989(03)
[50]黄淼,王昕,王振雷.一类非线性系统的基于时间序列的多模型自适应控制[J].自动化学报,2013,05:581-586.